牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.01.008

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (1): 56-61.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.01.008

牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析

杜巍，李树峰，佟慧丽，杨翠翠，刘丹，严云勤^*

（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030）

收稿日期:2013-06-17 出版日期:2014-01-23 发布日期:2014-01-23
通讯作者: 严云勤，教授，博士生导师，主要从事动物转基因的研究，E-mail:yanyunqin@sohu.com
作者简介:杜巍（1989-），女，黑龙江哈尔滨人，硕士，主要从事分子克隆与启动子活性研究，E-mail:924288993@qq.com
基金资助:
国家转基因专项“高产优质转基因肉牛新品种培育” (2011ZX08007-002)

Cloning and Functional Analysis of Bovine Desmin Gene Promoter

DU Wei,LI Shu-feng,TONG Hui-li,YANG Cui-cui,LIU Dan,YAN Yun-qin^*

(College of Life Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

Received:2013-06-17 Online:2014-01-23 Published:2014-01-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在克隆牛结蛋白基因不同长度的启动子片段，并对其进行功能分析。本研究采用PCR法扩增牛结蛋白基因不同长度的启动子缺失序列，构建pGL3-desminpro双荧光素酶表达载体，使其转染牛骨胳肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞，进行活性检测。同时转染牛MyoG和α-actin基因启动子的表达载体，以比较结蛋白启动子和MyoG及α-actin启动子的表达活性。结果表明，牛结蛋白基因的132～2 106 bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛骨胳肌卫星细胞中的表达，且都具有肌肉特异性。300 bp的结蛋白基因启动子活性最高，且高于牛MyoG和α-actin基因启动子的活性。从而筛选出300 bp的结蛋白基因启动子为活性较高且大小合适的肌肉特异性启动子，这为转基因肉牛的生产方面奠定了重要的基础。

Abstract:

This study aimed to clone bovine desmin gene promoter fragments of different lengths,and analyze its function.The bovine desmin gene promoter deletion sequences of different lengths were amplified by PCR,pGL3-desminpro dual luciferase expression vector transfected to skeletal muscle satellite cells and bovine fetal fibroblasts for activity detection was constructed.Meanwhile bovine MyoG and α-actin genes promoter expression vectors were transfected in order to compare the desmin,MyoG and α-actin genes promoter expression activity.The results showed that bovine desmin gene in the range of 132-2 106 bp promoter could start the expression of dual luciferase reporter gene at different degrees in bovine skeletal muscle satellite cells,and had muscle-specific.300 bp desmin gene promoter had the highest activity and higher than that of MyoG and α-actin genes promoter activity in bovine.Thus the 300 bp desmin gene promoter activity was higher and was adaptive to the muscle-specific promoter,which has laid an important foundation for the production of transgenic bovine.

中图分类号:

S823
Q523.8

杜巍，李树峰，佟慧丽，杨翠翠，刘丹，严云勤. 牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(1): 56-61.

DU Wei,LI Shu-feng,TONG Hui-li,YANG Cui-cui,LIU Dan,YAN Yun-qin. Cloning and Functional Analysis of Bovine Desmin Gene Promoter[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(1): 56-61.

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Cloning and Functional Analysis of Bovine Desmin Gene Promoter

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